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醋酸美侖孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮為合成的孕激素類藥物,有明顯的孕激素和抗雄激素作用,可抑制排卵。孕激素對垂體促性腺激素的釋放有一定的抑制作用,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明有死胎率增加和致畸作用,副作用有:(1)惡心、頭暈、倦怠;(2)突破性出血;(3)孕期服用,會(huì)增加女性后代的男性化作用。孕激素類藥物能增強(qiáng)體內(nèi)物質(zhì)沉積和改善生產(chǎn)性能,可以很快產(chǎn)生顯著和直接的經(jīng)濟(jì)效益,因此,對生產(chǎn)者有很大的吸引力。畜牧業(yè)中使用孕激素類藥物(非治療用途)已有很長的歷史,但人類長期食用含有激素的肉制食品,即使含量甚微,亦會(huì)明顯影響機(jī)體的激素平衡,而且有致癌危險(xiǎn),對幼兒造成發(fā)育異常等危害。因此,開發(fā)一種能檢測孕酮?dú)埩袅康姆椒ㄊ鞘直匾?。本文采用液相色譜法對牛和豬脂肪樣品中的孕酮進(jìn)行檢測.
1 試劑與儀器
1.1 試劑 醋酸美侖孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮標(biāo)準(zhǔn)品,乙腈,甲醇,乙酸乙酯,其他試劑為分析純。水由凈化系統(tǒng)制得。
?。ǎ保?biāo)準(zhǔn)儲備液:1000μg/ml,分別準(zhǔn)確稱取0.05g 醋酸美侖孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮標(biāo)準(zhǔn)品于50ml容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用一年。
?。ǎ玻┗旌现虚g溶液I:100μg/ml,分別吸取10.0ml 醋酸美侖孕酮、醋酸氯地孕酮和醋酸甲地孕酮標(biāo)準(zhǔn)儲備液于100ml 容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用一年。
(3)混合中間溶液II:1.0μg/ml,取1.00ml 混合中間溶液I于100ml 容量瓶中,用甲醇定容。于4℃保存,可使用半年。
(4)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別吸?。保啊ⅲ玻?、40、80、100μl 混合中間溶液II 添加到980、970、950、910、890μl 的乙腈-水(65:35)中,再加入10μl 0.2%鹽酸溶液,混勻,得到濃度為0.010μg/ml、0.020μg/ml、0.040μg/ml、0.080μg/ml 和0.10μg/ml 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,供液相色譜測定,當(dāng)日使用。
1.2 儀器 LC7000 液相色譜系統(tǒng),LC7011泵體,LC7020 紫外-可見檢測器,Hanon-Clarity色譜軟件。氮吹儀;海能全自動(dòng)固相萃取裝置;低溫離心機(jī);渦旋混勻器;CN 固相萃取柱。
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